鼠尾膠原蛋白I型

鼠尾膠原蛋白I型照片
  • 無塵車間內生產,保證潔凈度
  • 可用于包被細胞培養器皿(單分子層包被)
  • 也可形成具有一定強度的三維膠用于細胞的三維空間培養
  • 通過細胞培養測試(包括三維膠內的細胞培養)
  • 電泳結果和 Sigma 的同類產品無顯著區別。
  • 產品為無菌的溶液,省去從干粉配制的麻煩。

包裝規格

產品號品牌包裝規格
200110-10shengyou10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。
200110-50shengyou50mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。

產品說明

杭州欣友生物技術有限公司生產的鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen1 的方法,通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。

shengyou鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿,培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環境,使細胞在三維環境中生長。

shengyou鼠尾膠原蛋白包被pc-12細胞生長照片

shengyou鼠尾膠原蛋白包被的
培養皿中生長的 PC-12 細胞

shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠NIH-3T3細胞生長照片

shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠中
生長的 NIH-3T3 細胞(接種后 5天)

shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠電泳

和Sigma鼠尾膠原蛋白(cat# C7661)
SDS-PAGE 電泳對比。
A: Sigma B:shengyou

使用方法

1、細胞培養器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2

以包被濃度為 2 ug/cm2 為例:

用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應的培養器皿中:

表面積(cm2 ,每孔或每皿) 加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul )
96孔細胞培養板 0.3 50
24孔細胞培養板 1.9 300
12孔細胞培養板 3.8 600
6孔細胞培養板 9.5 1580
35mm細胞培養皿 8 1330
60mm細胞培養皿 21 3500
100mm細胞培養皿 55 9170

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后,用PBS洗3-4次后直接使用。

包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。

2、三維膠原的制備

shengyou鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。

需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水

A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。

B.含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準備好懸浮于培養液的細胞,并放置于冰浴中。將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。

注:鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。

1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.

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